多肽裂解仪操作使用

更新时间：2025-10-27

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　　多肽裂解仪的操作使用涵盖设备校准与准备、试剂与样品处理、裂解反应执行、产物纯化及设备维护五大核心环节，多肽裂解仪具体操作步骤及注意事项如下：

　　一、设备校准与准备

　　部件完整性检查

　　开机前检查电源线、反应器、泵、阀门等部件是否完好，确保无破损或松动。例如，若发现反应器密封圈老化，需立即更换以避免裂解过程中气体泄漏。

　　确认溶剂储液瓶与气体管道连接紧密，无泄漏。检查压缩空气(AIR)压力是否在60-100psi，氮气(N2)压力在5-10psi。

　　参数校准

　　根据实验需求预设裂解温度、压力、流速等参数。例如，酶解裂解时温度需精确控制在37℃，波动范围不超过±0.5℃。

　　定期校准温度传感器(每半年一次，误差需控制在±0.2℃以内)和压力传感器(每年一次)，确保数据准确性。

　　设备预热

　　打开合成仪电源，将设备预热至设定反应温度。预热时间因设备型号和温度而异，需耐心等待。

　　二、试剂与样品处理

　　试剂准备

　　准备裂解液(如TFA/水/三异丙基硅烷=95:2.5:2.5)、活化试剂(如HBTU、DCC)、溶剂(DMF、DCM)等，确保所有材料新鲜且纯净，避免杂质引入。

　　确认试剂无沉淀或变质，建议使用前过滤试剂，并标注开封日期，过期试剂及时废弃。

　　样品预处理

　　对高黏度或含颗粒物的样品进行离心、过滤等预处理，防止堵塞裂解腔或损伤泵体。例如，未预处理的样品可能导致泵体磨损率增加40%。

　　三、裂解反应执行

　　树脂与氨基酸固定

　　选择合适的固相载体(如Rink Amide Resin)，用二氯甲烷(DCM)溶胀树脂，去除杂质后抽干备用。

　　将目标氨基酸与活化试剂混合，形成活性酯后投入反应器，与脱保护的氨基结合形成肽键。

　　裂解反应

　　加入预冷的裂解液(如TFA混合液)，室温搅拌2小时。裂解过程中需实时监控温度、压力等参数，发现异常及时停机检查。

　　裂解结束后，放出反应液，抽滤除去树脂，并以TFA等溶剂洗涤树脂3次，合并滤液。

　　四、产物纯化

　　浓缩与沉淀

　　将裂解液转入旋转蒸发仪中室温浓缩至小体积，加入甲基叔丁基醚(MTBE)使多肽析出。

　　通过离心(10,000rpm，10分钟)收集沉淀，用冷乙醚洗涤3次，干燥得粗肽。

　　高效液相色谱(HPLC)纯化

　　使用C18反相柱进行纯化，流动相A为0.1% TFA/水，流动相B为0.1% TFA/乙腈。梯度洗脱条件下(0-30分钟内B相从10%升至60%)，收集目标峰。

　　经HPLC纯化后，多肽纯度可从85%提升至98%。

　　五、设备维护与保养

　　日常清洁

　　每次使用后，用去离子水冲洗反应器内壁，去除残留裂解液和蛋白质碎片。对于顽固污渍，可使用含酶洗涤剂浸泡后刷洗。

　　每周用75%乙醇或0.1%次氯酸钠溶液对管道进行循环消毒，防止微生物滋生。消毒后需用氮气吹干管道。

　　易损部件更换

　　每3个月检查密封圈弹性，若出现硬化或裂纹需立即更换。每1-2个月更换进气过滤器，防止灰尘进入设备内部。

　　对泵体、阀门等运动部件每季度加注专用润滑油(如硅基润滑脂)，减少摩擦磨损。

　　长期存放管理