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多肽合成具体合成由这几个循环组成
点击次数:52 发布时间:2023-01-12
  多肽合成具体合成由下列几个循环组成:
 
  除去保护Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂(piperidine)去除氨基的保护基团。激活和交联下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活。化学工艺常用HBTU/HCTU/HITU/HATU+NMM/DIPEA或HOBT+DIC作激活剂,激活的单体与游离的氨基反应交联,形成肽键。 在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环:这两步反应反复循环直到合成完成。
 
  氨基酸缩合结束后,可用适量TFA进行洗脱,根据起酸碱性,可选择10%TFA/DCM溶液,至100%TFA,以此类推。(注:此种方法为个人合成经验,并无文献资料可查;可根据需要进行参考。 知识有限,望谨慎参考)
 
  HPLC分析和纯化高效液相色谱hplc流程示意分析HPLC使用柱子和泵系统,可以经受传递高压,这样可以用极细的微粒(3-10μm)做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。
 
  HPLC分两类:离子交换和反相。离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。 柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸组成表现出相反电荷。分离是一种电荷相互作用,通过可变PH,离子强度,或两者洗脱出多肽,通常,先用低离子强度的溶液,以后逐渐加强或一步一步加强,直到多肽火柱中洗脱出。 离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。
 
  如sulfoethylaspartimide通过酸性PH中带正电来分离。反相HPLC条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上,用降低离子强度洗脱,如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成,这种链长度为G4-G8碳原子。
 
  由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的,高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。然而,总体实践中,这两类柱互变无多少显着差别,别类载体由碳水化合物构成,比如苯基。
 
  hplc法检测图谱典型的操作常由两绶冲剂组成,0。1%TFA-H2o和80%acetonitrile0。 1%TFA--H2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0。5%到1。0%改变的速度混合。
 
  常见分析和纯化用柱为4。6×250mm(3-10μm)和22×250mm(10μm)。如果用径向填柱,那么大小是8×100(3-10μm)和25×250mm(10μm)大量各种缓冲剂含许多不同试剂,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸,稀Heformic酸(5-6%,pH2-4),10-100mMNH4HCO3,醋酸钠/氨,TFA/TEA,磷酸钠或钾,异戊酚。
 
  这样许多不同组合可形成缓冲剂,但要注意一点:硅反相柱料不能长时间暴露于高pH,甚至微碱pH,因为这样会破坏柱子。
 
  不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%,而肽含量相关带电基团(如Arg,Lys)的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。

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