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多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成
点击次数:221 发布时间:2022-05-10
  今天为大家分享一下关于多肽溶解的方法,下面让我们一起来了解一下吧。
 
  1. 多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成
 
  虽然疏水肽链二级结构的形成更明显,但除了最短的肽链外,该现象发生在几乎所有肽链,与极性无关。因此,溶解多肽的第一个原则是用无菌的蒸馏水或去离子水(如果条件允许则用无氧水)。
 
  多肽溶液可能遇到细菌降解。为避免该现象的发生, 多肽应溶解在无菌的蒸馏水中, 或者用0.45或0.2μm孔径的滤膜过滤除菌。包含Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化, 因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到。
 
  2. 若多肽不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意: 超声处理会引起溶液发热和多肽降解。
 
  3.若多肽中包含多个碱性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液;对于疏水性非常强的多肽,则使用50%乙酸。
 
  4.若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。pH值在层析前必须调整。
 
  5.异丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有机溶剂的量则必须很少,否则将严重影响停留时间。
 
  6.若多肽因为含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烃侧链而高度疏水,或为中性肽时, DMF或DMSO等膜变性剂的使用,有助于多肽的溶解。
 
  a. 高浓度膜变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶。
 
  b.膜变性剂适于多肽分析液的制备, 但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰。
 
  c. DMF是最佳变性剂(最高浓度可达30%), 滴加至多肽溶解。
 
  d. 反相层析时, DMF将与洗脱液前峰一起流出, 依注入量的多少, 峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF 流出后几分钟内流出, 若肽链很小, 洗脱太早, 多肽的量将降低。

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