多肽裂解仪通过物理、化学或生物方法打断多肽链中的肽键,将复杂蛋白质转化为可分析的肽段。多肽裂解仪其技术路径主要分为三大体系:
酶解法
原理:利用生物酶(如胰蛋白酶、胃蛋白酶)的特异性切割能力,在温和条件(如37℃恒温)下精准识别并断裂特定氨基酸残基(如赖氨酸、精氨酸)羧基端的肽键。
优势:裂解产物片段长度均一,适用于多肽序列分析、质谱鉴定等场景。例如,胰蛋白酶可在16小时内将牛血清白蛋白裂解为理论覆盖度超80%的肽段混合物。
局限:对酶解条件(如pH、温度)敏感,且难以处理含大量脯氨酸或修饰氨基酸的多肽。
化学裂解法
原理:通过强酸(如6M盐酸)或强碱(如氢氧化钠溶液)在高温(100℃)条件下实现分子级断裂,适用于难降解的胶原蛋白、角蛋白等。
优势:裂解效率高,可处理复杂样本。
局限:反应条件剧烈,可能导致非特异性断裂或氨基酸侧链修饰,需后续纯化步骤。
物理裂解法
原理:利用激光(如193nm准分子激光脉冲)在纳秒级时间内产生局部超高温,使肽键发生非热力学断裂。
优势:无化学试剂残留,适用于对化学污染敏感的样本(如临床诊断标本)。
局限:设备成本高,操作技术要求严格。