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多肽合成的步骤介绍
点击次数:746 发布时间:2019-10-12
多肽合成又叫肽链合成,是一个固相合成顺序一般从C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。
 
多肽合成的步骤:
 
1、树脂的选择及氨基酸的固定
 
  用于多肽合成的高分子的载体主要有3类:交联聚苯乙烯;聚酰胺;聚乙烯乙二醇脂类树脂。氨基酸的固定主要是通过保护的氨基酸的羧基同树脂的反应基团之间形成共价键来实现。
 
2、氨基、羧基、侧链的保护及脱除
 
  要成功合成具有特定的氨基酸顺序的多肽,需要对暂不参与形成酰胺键的氨基和羧基加以保护,同时对氨基酸侧链上的活性基团也要保护,反应完成后再将保护基团除去。
 
  近年来,FMOC合成法得到了广泛的应用。羧基通常用形成酯基的方法进行保护,甲酯和乙酯是逐步合成中保护羧基的常用方法。
 
3、成肽反应
 
  固相中的成肽反应一般是将两个相应的氨基被保护的氨基酸,及羧基被保护的氨基酸放在溶液内并不形成肽键,要形成酰胺键,经常用的手段是将羧基活化,变成混合酸酐、活泼酯、酰氯或用强的缩合剂(如碳二亚氨)形成对称酸酐等方法来形成酰胺键。
 
4、裂解及合成肽链的纯化
 
  BOC法用TFA+HF裂解和脱侧链保护基,FMOC法直接用TFA,有时根据条件不同,其它碱、光解、氟离子和氢解等脱保护方法也被采用。合成肽链进一步的精制、分离与纯化通常采用液相色谱、亲和层析、毛细管电泳等。

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